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doi:10.22028/D291-22950
Title: | Die Rolle von Sec63p in der ER-assoziierten Degradation von S. cerevisiae |
Other Titles: | The role of Sec63p in the ER-associated degradation in S. cerevisiae |
Author(s): | Servas, Christina |
Language: | German |
Year of Publication: | 2013 |
SWD key words: | Endoplasmatisches Retikulum Saccharomyces cerevisiae Qualitätskontrolle Degradation |
Free key words: | ER-assoziierte Degradation Proteinqualitätskontrolle ER-associated degradation protein quality control |
DDC notations: | 570 Life sciences, biology |
Publikation type: | Dissertation |
Abstract: | Fehlgefaltete sekretorische Proteine werden aus dem Lumen des Endoplasmatischen Retikulums (ER) in das Cytoplasma transloziert, wo sie von dem Ubiquitin-Proteasom-System degradiert werden (ER-assoziierte Degradation, ERAD). Wie genau die Proteine aus dem ER transportiert werden, ist noch nicht geklärt. Verschiedene Studien, die eine einzige „leaky“ sec63-Mutante verwendeten, lassen vermuten, dass Sec63p beim Proteinexport beteiligt sein könnte. Um diesen Sachverhalt genauer zu erforschen, habe ich einen Screen verwendet, bei dem willkürliche Punktmutationen in das SEC63-Gen eingefügt wurden. Ich habe die Mutanten auf Akkumulation des ERAD-Substrats CPY* getestet, welche auf einen Defekt bei dessen Degradation hindeutet. Ich habe sechs Mutanten isoliert, wovon nur sec63-402 eine deutliche Akkumulation von CPY* aufwies. Diese Mutante trägt eine Mutation in dem Interaktionsbereich mit dem Chaperon Kar2p, der sogenannten J-Domäne. Mutanten mit Punktmutationen in der Transmembran-, Brl- oder sauren Domäne wiesen keine Degradationsdefekte auf. Durch Untersuchung von anderen ERAD-Substraten zeigte sich, dass sich der Degradationsdefekt in sec63-mutierten Hefezellen auf lösliche Proteine beschränkt. Meine Ergebnisse deuten darauf hin, dass Sec63p durch seine Interaktion mit Kar2p an der Degradation von löslichen ERAD-Substraten beteiligt ist. Misfolded secretory proteins are translocated from the lumen of the endoplasmic reticulum (ER) to the cytoplasm for degradation by the ubiquitin-proteasome system (ER-associated degradation, ERAD). How exactly this export from the ER is accomplished is still not understood. Several studies using a single leaky sec63 mutant suggested that Sec63p might be involved in protein export. To examine this issue further, I used a screen in which random point mutations were inserted into the SEC63 gene. I tested the mutants for accumulation of the ERAD substrate CPY*. Accumulation of CPY* in cells indicates a degradation defect. I isolated six sec63 mutants of which only sec63-402 showed a strong accumulation of CPY*. This mutant carries a mutation in the interaction area with the chaperone Kar2p, the so called J-domain. Mutants with point mutations in the transmembrane, the Brl or the acidic domain caused no detectable ERAD defect for CPY*. The examination of other ERAD substrates showed that sec63-402 affected only degradation of soluble substrates. This demonstrates that in yeast the interaction of Sec63p with Kar2p is important for the specific degradation of soluble ERAD substrates. |
Link to this record: | urn:nbn:de:bsz:291-scidok-57187 hdl:20.500.11880/23006 http://dx.doi.org/10.22028/D291-22950 |
Advisor: | Römisch, Karin |
Date of oral examination: | 20-Mar-2014 |
Date of registration: | 3-Apr-2014 |
Faculty: | NT - Naturwissenschaftlich- Technische Fakultät |
Department: | NT - Biowissenschaften |
Collections: | SciDok - Der Wissenschaftsserver der Universität des Saarlandes |
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