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doi:10.22028/D291-39559
Titel: | Refined protocols of tamoxifen injection for inducible DNA recombination in mouse astroglia |
VerfasserIn: | Jahn, Hannah M. Kasakow, Carmen V. Helfer, Andreas Michely, Julian Verkhratsky, Alexei Maurer, Hans H. Scheller, Anja Kirchhoff, Frank |
Sprache: | Englisch |
Titel: | Scientific Reports |
Bandnummer: | 8 |
Heft: | 1 |
Verlag/Plattform: | Springer Nature |
Erscheinungsjahr: | 2018 |
Freie Schlagwörter: | Astrocyte Gene expression |
DDC-Sachgruppe: | 610 Medizin, Gesundheit |
Dokumenttyp: | Journalartikel / Zeitschriftenartikel |
Abstract: | Inducible DNA recombination of foxed alleles in vivo by liver metabolites of tamoxifen (TAM) is an important tool to study gene functions. Here, we describe protocols for optimal DNA recombination in astrocytes, based on the GLAST-CreERT2/loxP system. In addition, we demonstrate that quantifcation of genomic recombination allows to determine the proportion of cell types in various brain regions. We analyzed the presence and clearance of TAM and its metabolites (N-desmethyl-tamoxifen, 4-hydroxytamoxifen and endoxifen) in brain and serum of mice by liquid chromatographic-high resolution-tandem mass spectrometry (LC-HR-MS/MS) and assessed optimal injection protocols by quantitative RT-PCR of several foxed target genes (p2ry1, gria1, gabbr1 and Rosa26-tdTomato locus). Maximal recombination could be achieved in cortex and cerebellum by single daily injections for fve and three consecutive days, respectively. Furthermore, quantifying the loss of foxed alleles predicted the percentage of GLAST-positive cells (astroglia) per brain region. We found that astrocytes contributed 20 to 30% of the total cell number in cortex, hippocampus, brainstem and optic nerve, while in the cerebellum Bergmann glia, velate astrocytes and white matter astrocytes accounted only for 8% of all cells. |
DOI der Erstveröffentlichung: | 10.1038/s41598-018-24085-9 |
URL der Erstveröffentlichung: | https://www.nature.com/articles/s41598-018-24085-9 |
Link zu diesem Datensatz: | urn:nbn:de:bsz:291--ds-395590 hdl:20.500.11880/35654 http://dx.doi.org/10.22028/D291-39559 |
ISSN: | 2045-2322 |
Datum des Eintrags: | 17-Apr-2023 |
Bezeichnung des in Beziehung stehenden Objekts: | Supplementary information |
In Beziehung stehendes Objekt: | https://static-content.springer.com/esm/art%3A10.1038%2Fs41598-018-24085-9/MediaObjects/41598_2018_24085_MOESM1_ESM.pdf |
Fakultät: | M - Medizinische Fakultät |
Fachrichtung: | M - Experimentelle und Klinische Pharmakologie und Toxikologie M - Physiologie |
Professur: | M - Prof. Dr. Frank Kirchhoff M - Keiner Professur zugeordnet |
Sammlung: | SciDok - Der Wissenschaftsserver der Universität des Saarlandes |
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